細胞培養(yǎng)技術(shù)作為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究的重要手段，在生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)研究、生物制藥等領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用。勁馬生物帶你了解細胞培養(yǎng)的基本概念、常用方法及注意事項。
一、細胞培養(yǎng)的基本概念
細胞培養(yǎng)技術(shù)是指從生物體內(nèi)取出組織或細胞，在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度及酸堿度和一定營養(yǎng)條件下，使細胞生長繁殖并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種重要技術(shù)。細胞培養(yǎng)技術(shù)主要包括細胞培養(yǎng)的類型、培養(yǎng)基、細胞的消耗物質(zhì)、細胞培養(yǎng)的設(shè)備和細胞培養(yǎng)的步驟等幾個方面。
1. 細胞培養(yǎng)的類型
原代細胞培養(yǎng)：直接從體組織中分離出來的生物細胞進行培養(yǎng)。這種方法繁瑣且細胞數(shù)量和品質(zhì)難以保證，因此在實驗室中較少使用。
繼代細胞培養(yǎng)：從已經(jīng)培養(yǎng)的細胞中分離出來的細胞進行培養(yǎng)，是實驗室常用的方法。
2. 培養(yǎng)基
培養(yǎng)基是提供細胞分裂和生長所需營養(yǎng)物質(zhì)的重要物質(zhì)，通常由肝素、胰島素和細胞因子等多種化合物構(gòu)成，以滿足不同類型細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的需求。
3. 細胞的消耗物質(zhì)
細胞培養(yǎng)期間需要提供多種物質(zhì)，包括抗生素(防止感染)、氣體(氧氣和二氧化碳保證正常生長)、酸堿指示劑(檢測培養(yǎng)基的酸堿度)等。
4. 細胞培養(yǎng)設(shè)備
細胞培養(yǎng)常用的設(shè)備包括培養(yǎng)箱(控制溫度、濕度和氧氣)、顯微鏡(觀察細胞形態(tài)和生長情況)、細胞培養(yǎng)板(培養(yǎng)細胞和收集細胞)等。
二、細胞培養(yǎng)的常用方法
1. 細胞傳代
細胞傳代是將健康細胞從舊培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖的過程。
具體步驟：
貼壁細胞：吸盡舊培養(yǎng)基，PBS清洗去除血清和死細胞，加入消化液消化細胞，待細胞收縮變圓或脫落后，加入充分培養(yǎng)基輕輕吹打，使細胞成單個懸浮，離心后重懸于新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。
懸浮細胞：可直接將細胞原液分置新培養(yǎng)瓶中，加入充分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
2. 細胞復(fù)蘇
細胞復(fù)蘇是將凍存的細胞快速解凍并置于新培養(yǎng)基中培養(yǎng)的過程。
具體步驟：
準(zhǔn)備適宜的培養(yǎng)基和血清。
將凍存管迅速放入37℃水浴中搖動至融化。
在無菌條件下，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到含有全部培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
三、細胞培養(yǎng)的注意事項
1.無菌操作：無菌是體外培養(yǎng)細胞的首要條件，必須確保無菌工作區(qū)域、良好的個人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。
2.適宜的培養(yǎng)條件：包括溫度(一般為37℃)、pH值(7.2～7.4)、滲透壓(260～320mmol/L)等，這些條件對細胞的生長至關(guān)重要。
3.合適的培養(yǎng)基和血清：培養(yǎng)基和血清的種類和比例應(yīng)根據(jù)細胞類型和實驗?zāi)康倪M行選擇。
4.定期觀察和記錄：定期觀察細胞生長情況，記錄細胞形態(tài)、密度和生長速度等指標(biāo)，以便及時調(diào)整培養(yǎng)條件。
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