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1. 用于一般免染的抗體是否都可以用作免疫沉淀實驗？ 
答：抗體的性質(zhì)對免疫沉淀實驗影響很大?？贵w不同，和抗原以及Protein G或Protein A的結(jié)合能力也就不同。所以一般免染能結(jié)合的抗體未必能用于IP反應(yīng)。 一般來說，多抗是沉淀反應(yīng)zuihao的選擇。另外，純化的單抗、腹水和雜交瘤上清液也可用于免疫沉淀。
2. 為什么溶解抗原的緩沖液中要加入一定量的蛋白酶抑制劑？ 
答：從活性細(xì)胞裂解出來的樣品中，往往含有一定量的蛋白酶。為防止預(yù)檢測蛋白的分解，修飾，溶解抗原的緩沖液必須加蛋白每抑制劑，并且在低溫下進(jìn)行實驗。
3. 溶解抗原的緩沖液的配制需要注意什么？ 
答：多數(shù)的抗原是細(xì)胞構(gòu)成的蛋白，特別是骨架蛋白，緩沖液必須要使其溶解。為此，必須使用含有強(qiáng)表面活性劑的緩沖液，盡管它有可能影響一部分抗原抗體的結(jié)合。另一面，如用弱表面活性劑溶解細(xì)胞，就不能充分溶解細(xì)胞蛋白。即便溶解也產(chǎn)生與其它的蛋白結(jié)合的結(jié)果，抗原決定族被封閉，影響與抗體的結(jié)合。
4. 免疫沉淀實驗應(yīng)如何把握抗體和緩沖液的比例？ 
答：每次沉淀實驗之前，考慮抗體/緩沖液的比例十分重要?？贵w過少就不能檢出抗原，過多則就不能沉降在beads上，殘存在上清；緩沖劑太少則不能溶解抗原，過多則抗原被稀釋。具體比例視具體情況而定。
5. 免疫沉淀應(yīng)該如何配制細(xì)胞裂解液？ 
答：適當(dāng)?shù)募?xì)胞裂解液的選擇取決于所要研究蛋白的特性。TritonX-100,NP40是非離子界面活性劑，作用溫和;DOC(sodium de-oxycholate)，SDS是離子性的強(qiáng)活性劑。所以裂解液的配制時所用去污劑的種類和濃度以及鹽濃度等條件需實驗者進(jìn)行優(yōu)化。注意如果忘記加TritonX-100，只加DOC或SDS，可能使抗體*失去活性。
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