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ELISA法評(píng)價(jià)腸道免疫功能

ELISA 法評(píng)價(jià)腸道免疫功能是通過(guò)檢測(cè)不同炎癥蛋白如急性期炎癥蛋白 MPO，血清淀粉樣蛋白 SAA 或細(xì)胞因子如 IL-6，IL-1b 等的表達(dá)水平。

器材：

組織勻漿器、酶標(biāo)板、酶標(biāo)儀。

試劑：

 ① 組織裂解液（200 mmol/L NaCl，5 mmol/L EDTA，10 mmol/L Tris，10% glycine，1 mmol/L PMSF，1 mg/ml Leupeptide，28 mg/ml aprotinin；pH7.4）;

 ② PBS 緩沖液;

 ③ BCA 蛋白濃度檢測(cè)試劑。

 ④ ELISA 試劑盒

步驟

ELISA 法評(píng)價(jià)腸道免疫功能的基本過(guò)程可分為如下幾步，以檢測(cè)急性期炎癥蛋白 MPO 為例：

 A 取出目的腸道組織，在冰冷的 PBS 中縱向剪開(kāi)，小心洗去腔內(nèi)的消化液，在平板紙上吸去多余液體。

 B 10 ml 圓底離心管中加入 1～2 ml 組織裂解液和漂洗后的腸組織，在冰浴狀態(tài)下勻漿 30 秒。

 C 冰上孵育 10 分鐘，全部轉(zhuǎn)移 1.5 ml EP 管中，4 ℃ 離心 15 分鐘，轉(zhuǎn)速 12000 r/min。

 D 小心分離上清，使用 BCA 法測(cè)定蛋白濃度。

 E 測(cè)定濃度后的上清分裝后 - 80℃ 保存或冰上等待，立刻用于 ELISA 檢測(cè)。

 F 根據(jù) ELISA 試劑盒配備的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行 MPO 的水平檢測(cè)。如下圖所示

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