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熒光定量PCR系列問題之無Ct值(信號(hào))出現(xiàn)有以下幾種可能原因及解決方法解析:歡迎閱讀參考。
反應(yīng)循環(huán)數(shù)不夠
一般都要在35個(gè)循環(huán)以上,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況增加循環(huán)(如至45循環(huán)), 但高于45個(gè)循環(huán)會(huì)增加過多的背景信號(hào)
檢測熒光信號(hào)的步驟有誤
一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集,Taqman法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸結(jié)束采集信號(hào)
引物或探針降解
可通過PAGE電泳檢測其完整性
模板量不足
對(duì)未知濃度的樣品應(yīng)從系列稀釋樣本的zui高濃度做起
模板降解
避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況發(fā)生
目的基因在組織中不表達(dá)或者表達(dá)量低
嘗試其它組織
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