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植物組織SOD活性測定方法

2025年06月10日 14:20:25      來源:上海勁馬實驗設(shè)備有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺      閱讀量:8

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             植物組織SOD活性測定

樣本提?。悍謩e取0.4g材料于預(yù)冷的研缽中,加入8 ml預(yù)冷的50 mmol-1磷酸緩沖液(pH 7.8)(先加2ml, 在冰浴下研磨成勻漿后,將勻漿轉(zhuǎn)入10ml離心管,再用6ml沖洗),10000 rpm離心15 min,取上清液定容至10ml后于4保存。上清液用于可溶性蛋白質(zhì)含量、SOD活性及POD活性的測定。

 

SOD活性測定

1.顯色反應(yīng) 取5mL指形管(要求透明度好)4支,2支為測定管,另2支為對照管,按表47–1加入各溶液。 混勻后,給1支對照管照上比試管稍長的雙層黑色硬紙?zhí)渍诠猓c其他各管同時置于4000lx日光燈下反應(yīng)20-30 min(要求各管照光情況一致,反應(yīng)溫度控制在25~35℃之間,使酶活性高低適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)時間)。

當(dāng)樣品數(shù)量較大時,可在臨用前根據(jù)用量將表47–1中各試劑(酶液和核黃素除外)按比例混合后一次加入2.65mL,然后依次加入核黃素和酶液,使終濃度不變。

 

 

表 47-1 各溶液顯色反應(yīng)用量

試劑酶)

用量(mL)

終濃度(比色時)

0.05mol/L磷酸緩沖液

1.5

 

130mmol/LMet溶液

0.3

13mmol/L

750μmol/LNBT溶液

0.3

75μmol/L

100μmol/L EDTA-Na2

0.3

10μmol/L

20μmol/L核黃素

0.3

2.0μmol/L

酶液

0.1

2支對照管以緩沖液代替酶液

蒸餾水

0.5

 

總體積

3.3

 

3.SOD活性測定

至反應(yīng)結(jié)束后,用黑布罩蓋上試管,終止反應(yīng)。以遮光的對照管作為空白,分別在560nm下測定各管的OD值,計算SOD活性。

3.<結(jié)果計算>

已知SOD活性單位以抑制NBT光化還原的50%為一個酶活性單位表示,按下式計算SOD活性。 SOD總活性[u/g(FW)]=

式中:SOD總活性以酶單位每克鮮重表示。

比活力單位以酶單位每毫克蛋白表示。

ACK ——照光對照管的吸光度。

AE ——樣品管的吸光度。

VT ——樣品液總體積,mL。

V1 ——測定時樣品用量,mL。

W——樣品鮮重,g。

蛋白質(zhì)含量單位為mg/g。

上海勁馬生物科技有限公司提供植物SOD活性檢測技術(shù)服務(wù),洽談,我們將為你提供的產(chǎn)品與技術(shù)服務(wù)。

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